AAV 载体包装容量比较小，所以做敲除的话，不能带 spcas9（4104bp），只能带 sacas9（3159bp），SaCas9识别的 PAM 区为 NNGRRT（NNGAAT, NNGAGT, NNGGAT, NNGGGT），Spcas9 识别的 PAM 序列是 NGG，所以 sacas9 对gRNA 设计的要求更高，相对 spcas9，可以设计的位点更少。sacas9 的编辑效率小于 spcas9，而且体内的感染效率相对体外更低（尤其是要同时转入 saCas9 和 gRNA），也不能进行筛选，所以尽量选择敲低的方法。