AAV为什么不适合作为载体做体内敲除?
AAV为什么不适合作为载体做体内敲除?
By 减肥呀减肥呀
at 2024-05-24
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AAV为什么不适合作为载体做体内敲除?
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1 个回复 | 最后更新于 2024-05-24
AAV 载体包装容量比较小,所以做敲除的话,不能带 spcas9(4104bp),只能带 sacas9(3159bp),SaCas9识别的 PAM 区为 NNGRRT(NNGAAT, NNGAGT, NNGGAT, NNGGGT),Spcas9 识别的 PAM 序列是 NGG,所以 sacas9 对gRNA 设计的要求更高,相对 spcas9,可以设计的位点更少。sacas9 的编辑效率小于 spcas9,而且体内的感染效率相对体外更低(尤其是要同时转入 saCas9 和 gRNA),也不能进行筛选,所以尽量选择敲低的方法。