如果慢病毒发生感染后治疗措施有那些

慢病毒发生溅潵后应急措施

慢病毒操作中注意事项

慢病毒生物安全等级是多少

Keima来源于珊瑚虫，是一种发射峰为620nm的荧光蛋白，具有PH值依赖性的双峰激发光谱，在中性和酸性环境中分别于440nm和550nm处被激发，因此，随着时间的推移，递送到溶酶体的keima量可以通过在550nm处激发的信号强度和在440nm处激发的信号强度的比值来估计。蓝色滤光片和绿光滤光片两个通道都

这种情况首先需要比对两个物种的基因核苷酸序列以及碱基序列，如果一致，则过表达与干

扰都可以通用；但如果碱基序列不一致，但同源性极高，就可以比对一下蛋白序列。如果蛋

（1）这两个载体的元件大致相同，对于miRNA和靶基因相关的荧光素酶实验来说没什么

miRNA sponge可以吸附众多miRNA的分子，典型结构是包含

 能针对某一基因的特定结构域做敲低或敲除而不影响其他结构域的表达并发
挥功能吗？

腺病毒感染 离体 细胞后多久到表达高峰？ 腺病毒用于动物在体实验可以维
？ 持多长时间？ 腺病毒可以用于什么样的动物实验？

人原代 T 细胞 、 鼠原代 T 细胞 、 Jurkat 细胞 （ 悬浮细胞 ） 分别推荐用什么病
毒来感染？

慢病毒载体转染时荧光很亮 ， 但是包装成病毒并感染目的细胞后 ， 荧光弱或
者根本不亮，是什么原因？是目的基因未表达吗？

siRNA和shRNA在结构上是不一样的，siRNA为化学合成，使用浓度一般为5μM，浓度较高， 
瞬时转染时如细胞转染效率尚可，瞬时进入细胞中的分子数超过108，且不需要经过剪切加工就 可和靶点结合，干扰效率高。 
shRNA则是将干扰基因克隆到DNA上，经过病毒整合（慢病毒）或非整合（腺病毒，腺相 
关病毒）进入到细胞后，转录形成发夹RNA，再经过一系列酶的剪切加工，才形成可以和靶点结 合的干扰RNA。这个过程中因为拷贝数低（如慢病毒需要整合基因组），转录加工过程复杂，会 导致干扰效果不理想。

用293A细胞，293A细胞是293来源的细胞，含有腺病毒E1早期基因，而我们使用的腺病毒载体为了提供克隆的空间，即装载外源基因空间，缺失了E1的早期区，因此当我们转然Ｅ１缺失的病毒载体到293A时，由于293A能提供E1早期蛋白，才能形成有感染力的腺病毒颗粒。

1、首先确定实验对象是细菌、动物还是植物。
2、（下面以哺乳动物为例）
3、确认是做动物实验还是细胞实验。
4、如果是做细胞实验，需要先确定是过表达目的基因还是干扰目的基因，如果是过表达则可以选择CMV、EF1a等二型启动子；如果是干扰则可以选择U6、H1等三型启动子。这里需要特别注意的是三型启动子不能启动含有连续四个T的干扰序列，如果干扰序列中含有连续的四个T，那么则需要更换启动子为二型启动子，干扰序列采用mir-30结构。
5、如果是做动物实验，则需要确定是否需要特异性表达，以此来确定是否需要选择特异性启动子。无论是过表达目的基因还是干扰目的基因都可以

1、CMV启动子作为最为广泛使用的启动子，适合在肿瘤细胞、肌肉、肝脏等体细胞或者贴壁细胞的表达，不适合大多数干细胞、悬浮细胞及原代细胞的表达；

2、EF1α启动子适合干细胞、原代细胞、造血细胞等的表达，在常用细胞如HEK293、肿瘤等细胞系中弱于CMV；

3、CAG启动子在不少细胞系，诸如免疫细胞、体细胞，有不次于CMV的表达效率，也是基因表达的一个较优选择的启动子。

市面上 LV、AD、AAV这三种病毒 常见的包装体系分别是什么？

Flag/6His/Myc 等蛋白标签一般带在蛋白的 N 端还是 C 端？

Lipofiter/Lipofiter3.0/RNAfit 转染试剂直接放 -20℃了，还能用吗？

目的基因带 3FLAG 标签，用目的抗体和 FLAG 抗体进行 WB 检测  分别是什么样的？对照载体上的 3FLAG 会不会表达？

pAAV-RC：Rep在病毒复制、基因表达调控及宿主染色体定点整合、病毒包装中起重要作用。Cap通过不同的翻译起始子编码生成包装病毒的外壳。不同血清型的主要区别在于衣壳蛋白 Cap的不同，并决定各种血清型AAV对不同组织和细胞有不同的感染效率。应用AAV2的ITR 以及全部或部分AAV2的rep蛋白，换上其他血清型AAV的cap蛋白，可以得到具有各血清型感染特征的杂合

MOI：感染复数。是感染时细胞与病毒的数量比值，也就是平均每个细胞感染病毒的数量。 病毒体积= 细胞数ⅹmoi/病毒滴度，一般慢病毒 30-50 摸索，腺病毒 200 左右摸索

（1）过表达用的是 II 型启动子，是依赖 II 型 RNA 聚合酶的启动子，可以 启动长的片段，比如 CMV、EF1A 依赖 PolyA 进行转录终止

（2）干扰用的是 III 型启动子，是依赖Ⅲ型 RNA 聚合酶的启动子，比如 U6 ， H1 启动子，聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时,它指导的转录就会停止

共同点：都是绿色荧光蛋白，激发光和发射光都一样，激发光488nm,发射光510nm

区别：GFP 是在水母发现的，和 EGFP 的区别在于 EGFP 是 GFP 的增强版，发生了双氨基酸取代，64 位的苯丙氨酸被亮氨酸取代，65 位的丝氨酸被苏氨酸取代，与 GFP 相比，EGFP 具有更强更稳定的荧光。

不同种属间的基因过表达与干扰是否可以通用？

融合蛋白是怎么做的？ T2A 和 和 IRES 连接的怎么做？

荧光强弱跟什么有关？为什么我的荧光很弱有什么原因吗

敲除株筛选是不是直接通过抗性筛选就可以了？

如果载体带有zsgreen，就可以表达绿色荧光蛋白，这样可以在荧光显微镜下看绿色荧光。但是这个只能是观察是否感染上，就是看的是感染效率而非表达效率；如果看表达效率，需要做相应基因的QPCR和WB的。

miR理论上一般5p和3p两种成熟体形式都有，主要以一种成熟体稳定存在。hsa-mir-30a的5p是稳定的，3p