这种情况首先需要比对两个物种的基因核苷酸序列以及碱基序列，如果一致，则过表达与干扰都可以通用；如果碱基序列不一致，但同源性极高，

蛋白标签（protein tag）是指利用 DNA 体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白质，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。

在保证慢病毒感染效率的条件下，可能存在以下原因：

（1）细胞目

（1）调整细胞状态，感染时使用对数期的细胞；

（

CircRNA是反向剪接形成的环装RNA，这种过程是可以人工模拟的，常见的过表达载体如质粒、慢病毒、腺病毒、

AA

Cas9 滴度不高主要原因是基因太大了（cas9 有

GFP、EGFP、

（1）

一个基因的多个转录本通常是以下一种原因或者几种原因共同导致：

（1）

目前主流的lncRNA敲除方法主要有三种：全基因座敲除、敲入poly（

干扰首先需要比对两个物种的基因的转录本序列，如果干扰的靶点完全互补，在物种基因组上是唯一的，干扰很可能是有效果的，可以去验证一下看看敲低效率；如果有一个以上的碱基是不同的，即便靶点是特异的，敲低效率会很低。

融合蛋白是将两个目的基因连在一起的，第一个基因的终止密码子需要去掉，为了最大程度的缓解两个蛋白之间的互相影响，通常会在两个蛋白之间加上

不是的，通过抗性筛选可以将为转染成功的细胞杀死，留下的都是转染成功的细胞。但转染成功的细胞并不意味着敲除成功，Cas9 对靶基因的编辑会导致

目前最常用的方法是利用crispr-cas9的技术进行基因的敲除，需要将cas9蛋白和gRNA递送到细胞核中。递送的方法有质粒法，病毒法和蛋白法

启动子：不同启动子诱导荧光蛋白表达的强弱不同，应选择广谱性或者组织特异性的强启动
子，如 EF1α、CAG 等。
表达方式（融合/非融合）：融合蛋白表达的荧光亮度通常低于单独的荧光蛋白，融合表达
时，荧光蛋白可能出现错误折叠等现象，导致检测不到荧光信号或荧光较弱。
连接元件：在同一启动子下的非融合表达一般用 2A 肽或 IRES 将目的基因和荧光基因 ORF
分隔开。
2A 连接的是一个启动子启动的编码一条蛋白链的两个蛋白，在 2A 肽的位置

激发波长/发射波长：对于单色实验，绿色荧光蛋白是最常用的，选择两种或以上荧光蛋白
进行多色成像时，建议激发和峰值发射波长均相隔 50-60nm 以上。荧光蛋白应用于活体成像实验时，尽量选择红色或近红外的荧光蛋白，这类荧光蛋白的发射波长较长，具有更好的
组织穿透能力。单体性质：将荧光蛋白与目标蛋白进行融合表达，直接地追踪目标蛋白或是定位目标蛋白，
多聚体可能会影响融合蛋白的生物学功能或定位，应尽量选择单体。
PK 值：每个荧光蛋白都有其最合适的 pH 值。大多数细胞器内及细胞质的 pH 值