设计高效编辑的gRNA序列是cas9-gRNA敲除实验的关键，通常需要满足以下设计原则：

  1）靶位点应设计在外显子上，在基因上游越靠前越好；

  2）尽量避开 GC 富集区域，以防止甲基化对互补配对的干扰；

  3）gRNA应该以G 碱基开头，以提高U6的转录效率；

  4）选择特异性位点，以降低脱靶概率。