动物体内生理环境比较复杂，需要提高siRNA在体内的稳定性、半衰期、靶向性、纯度、药活性以及降低毒性后才能用于体内实验，采用增强稳定性和透膜效率的化学修饰（如2’-oMe\Chol等）的siRNA可达到更好的效果。siRN

目前用于研究转录因子于靶基因启动子结合的实验有：chip-qPCR；双荧光素酶实验；酵母单杂交点对点验证；凝胶阻滞实验EMSA。

Cas9的核酸酶剪切活性取决于两个结构域：RuvC和HNH，它们分别负责切割DNA链的两条链，将这两个保守的核酸内切酶结构域进行突变，其中RuvC催化结构域的第

设计高效编辑的gRNA序列是cas9-gRNA敲除实验的关键，通常需要满足以下设计原则：

  1）靶位点应设计在外显子上，在基因上

双分子荧光互补（Bimolecular fluorescence complementation, BiFC），该技术是利用荧光蛋白的特点来研究蛋白的相互作用。荧光蛋白可从特定的位点被分开，产生两个非荧光活性片段。当两片段分别被融合到相互作用的蛋白上时，会因蛋白的相互作用力而被拉近、发生互补从而重新构建成有活性的荧光蛋白并在激发光下产生荧光。因此利用荧光显微镜就可以直接通过观察

常用的载体可以按照属性、进入受体细胞的类型以及功能进行分类：

① 按照属性分为病毒载体和非病毒载体

研究蛋白互作的方法很多，大概分为如下几种：① 酵母双杂交技术：主要用于互作蛋白的筛选；② 免疫共沉淀；③ 免疫荧光共定位；④ GST Pull-down；⑤

蛋白磷酸化一般是发生在某个氨基酸上，① 磷酸化一般发生在丝氨酸（S）、苏氨酸（T）以及酪氨酸（Y），外源性的模拟磷酸化可以将S/T/Y

siRNA可用于体内实验，但是动物体内生理环境比较复杂，需要提高siRNA在体内的稳定性、半衰期、靶向性、纯度、活性以

tRNA来源的小RNA（

AAV8和AAV9血清型对肝脏均具有较好的嗜性，目前应用在

钙成像技术是利用特殊的荧光染料或钙离子指示剂，将神经元中钙离子浓度的变化通过荧光强度表现出来（即将看不见的钙离子信号变成看得见可检测的荧光信号），通过对钙离子变化的快速成像，反应神经元的活性变化。

目前使用比较多的钙离子指示剂主要包括化学荧光指示剂和荧光蛋白指示剂两大类。

AAV6、AAV8、

蛋白磷酸化修饰这一过程是通过蛋白激酶催化，将磷酸基团从ATP转移到多肽底物的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上，并且磷酸化修饰的过程是可逆的，蛋白磷酸酶可催化去磷酸化。蛋白磷酸化检测的方法包括：放射性标记、蛋白免疫印迹、荧光染料染色、流式细胞术和质谱等。其

THP-1细胞中文全名为人单核细胞白血病细胞，是一种悬浮细胞。培养时有以下注意事项：① 换液时需要预热的培养基；② 细胞对血清的要求比较高，建议用品质比较好的血清；③

一般来说，标签既可以添加在目的蛋白的N端，也可以添加在目的蛋白的C