① 抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。② 抗原修复不全，抗体无法识别。③

Keima是一种pH敏感的荧光蛋白，发射

如果是需要细菌稳定表达荧光蛋白，需要对细菌的基因组进行编辑，常规的方法有CRISPR/Cas9系统、基于

选择将标签融合到目标蛋白的C端还是

AAV感染肠道组织一般可以用腹腔注射、灌肠和肠系膜动脉注射；其中灌肠更易感染结肠，但是难度较大，用量较多。

假病毒的载体选择一般根据病毒的类型，比如：做RNA病毒的

肝脏血供丰富，穿刺肝叶容易出血，影响实验结果，所以肝脏一般是不推荐原位注射的；一般使用肝脏特异性启动子采用尾静脉注射就可以达到较好的效果。

Uniprot上一般会标注不同的蛋白亚型，可以先确定蛋白序列，之后根据

目的条带较弱可能的原因和调整方法：1）一抗与二抗

目前还没有针对专门感染坐骨神经的血清型和启动子，所以只能尝试用常规的AAV9

单个的Flag由

siRNA是小分子干扰

从mRNA到蛋白，也就是从转录到翻译，并不是

模拟磷酸化，一般是将磷酸化的位点突变为天冬氨酸（D

不能在显微镜下观察，Luc分为

一般干扰miRNA有2

一般是两种AAV各取一半的体积，混合之后注射，可以试一下，效果不好可以增加体积。

thp-1细胞一般是悬浮圆形生长，具有一定的密度依赖性，密度较低时生长较慢，当贴壁细胞比例高于20%