mRFP-EGFP-LC3中的mR

实验设计选择AAV主要考虑以下几个方面：① 需要感染的目的细胞或组织是什么？② 根据感染的部位选择合适的血清型、启动子、注射方式及注射量；③ 根据造模时间及目的考虑注射AAV

 细胞核定位的lncRN

对于融合荧光蛋白而言，有一个原则是尽可能地使融合蛋白之间互不影响，特别是目的蛋白。虽然ZsGreen亮度比

想要用cre-loxp的方法达到敲除效果，如果是通过系统性注射AAV感染肝脏，最好是结合肝脏特异性启动子；如果是原位注射，也可以考虑用广谱启动子

LSL（loxp

不是的，一般习惯用fluc作为主报告基因，Rluc作为内参，但其实

siRNA和shRNA在结构上是不一样的，

在没有转基因动物的情况下，可以利用工具病毒在体内建立cre

可以采用活体成像技术，前提是需要给肿瘤细胞带上荧光标记，可以是荧光素酶或者荧光蛋白标记都可以；另外，活体成像仪的光谱检测范围要在所带荧光标记的光谱范围内。

IP拉下来的目的蛋白量较少主要可能是三个原因：①可能是IP抗体的亲和力不足；②另一个原因可能是目的蛋白本身的表达量较低；③裂解细胞时蛋白被降解。如果是抗体的问题，就需要更换新抗体

AAV感染骨髓不推荐采用尾静脉注射，很难感染到骨髓腔内，更建议采用骨内注射。

可以做的，但是miRNA

WB的目的蛋白条带与理论值不一样，可能的原因有以下几个：

如果排除实验操作问题的话，可能是因为细胞本身的蛋白表达量低，可以采用外源性过表达提高目的蛋白的表达量。

不是的。建议使用激光共聚焦显微镜来观察，将绿光和红光的细胞图像merge后，统计单个细胞内的红色荧光点数和黄色荧光点数，然后计算它们的比值即可反映自噬流的情况。

AAV应用时效果不理想的有关影响因素很多，从病毒本身到检测目的基因表达这些过程都有涉及，具体可以从以下几个方面来分析：