DTR

基因的插入会影响位于其下游的荧光蛋白等基因的表达。对照病毒或干扰病毒，由于没有插入基因或者插入基因非常短，荧光通常较强。而插入了较长基因之后，荧光的亮度会随着插入基因的长度以及特殊结构的存在等而减弱，尤其是出现高GC

可以的，需多质粒共转染时，可将质粒按一定比例混合，之后根据核酸总量再与转染试剂按照合适的比例混合配置即可。

质粒或siRNA转染细胞过程中尽量避免使用血清和双抗，以提高转染效率。血清中含有大量的蛋白质，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体/

DREADDs技术原理是通过改变GPCR—乙酰胆碱受体的结构，使其只能被特定的化合物激活或抑制。G

DREADDs的特异性配体是CNO（氯氮平-N-

我们通常提及的逆转录病毒载体是γ-逆转录病毒载体，开发自

ssAAV（单链AAV）载体的病毒基因组是单链

（1）细胞可能被污染了，若发现早可根据具体污染的类型加入抑制污染剂及时补救；

可以的，但通常的干扰序列是shR

腺病毒感染悬浮细胞可采用平角离心转染法，即将适量的病毒液加入细胞培养皿后，封好口，放入平角离心机后，低速（1200g）离心

不是。AAV的不同血清型是由它的Ca

镜下观察发现类似病毒空斑或者细胞聚集的现象时，应继续培养1-3天，观察聚集区域是否扩散，若持续扩散一般为病毒毒斑，若聚集区域保持不变，则一般为细胞聚集

首先是腺病毒基因组的长度较大，达到36kb大小，分子操作难度大，所以包装重组腺病毒的时候通常是将穿梭质粒和骨架质粒共转至细胞中，采取同源重组的方式进行载体的连接、重组。而BJ51

一般不用重新包毒，腺病毒载体可以293A细胞中扩增，参考腺病毒扩增步骤操作即可。

目前科研使用的腺病毒载体经过了一系列的改造，病毒在293