做western blot跑蛋白发现条带大小跟理论值不一致,可能是什么原因?
做western blot跑蛋白发现条带大小跟理论值不一致,可能是什么原因?
By 梧桐树下
at 2024-05-11
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1 个回复 | 最后更新于 2024-05-11
WB的目的蛋白条带与理论值不一样,可能的原因有以下几个:
(1)要确定样品是内源性蛋白还是重组蛋白,如果是重组蛋白,表达的是否是全长
序列,如果不是,条带大小是会有差异的;
(2)可以查看一下目标蛋白是不是由其他转录本,抗原相同的话也会被检测到;
(3)蛋白本身可能存在翻译后修饰,例如糖基化、磷酸化、甲基化等均会增加蛋白的分子量;
(4)如果是条带大小与理论值有明显的倍数关系,可能是形成了二聚体或多聚体;
(5)凝胶浓度选择不当,如果凝胶浓度不适合目标蛋白的大小,可能会影响条带的迁移和分离;
(6)一抗的特异性不足,更换特异性更好的抗体;或者是抗体浓度过高、封闭不完全导致。