想问下有没有检测分子伴侣介导自噬的工具病毒?有的话原理是什么呢?
想问下有没有检测分子伴侣介导自噬的工具病毒?有的话原理是什么呢?
By 梧桐树下
at 2024-04-19
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1 个回复 | 最后更新于 2024-04-19
有的。分子伴侣介导自噬(CMA)的底物中均含有一个能被分子伴侣HSC70识别的五肽样基序(KFERQ序列),HSC70识别含KFERQ的底物后与溶酶体膜上的LAMP2A结合,随后使底物去折叠、易位,最后在溶酶体中降解。
基于这种严格的底物选择途径,可以将KFERQ与PAmcherry进行融合表达,构建KFERQ-PAmCherry1和PAmCherry1-KFERQ-NE两种病毒探针,感染目的细胞后直观地观察CMA的变化。当KFERQ-PAmCherry1靶向溶酶体时即可通过观察红色荧光斑点数来检测活细胞中的CMA活性。PAmCherry1-KFERQ-NE探针是在KFERQ-PAmCherry1的基础上增加了一种新型18个氨基酸的表位标签“NE”,这种标签能够用于特异性免疫检测和定量PAmCherry1-KFERQ蛋白表达量,满足多种实验需求。
PS:PAmCherry1是一种光活化蛋白,需要在405nm波长的光暴露5-10分钟进行活化后,才能被正常激发出荧光(564nm激发,595nm发射)。当然也可以换成mRFP。