细胞永生化最为常见的策略主要有三种：

（1）过表达病毒的基因，常见的病毒致癌基因包括：腺病毒的E1A/E1B、猿猴病毒40大T抗原(SV40 Tag)、人类乳头瘤病毒16的E6/E7基因(HPV16)，通常这些基因能抑制p16、pRB、p53功能，克服细胞的生长停滞，诱导细胞增殖。

（2）过表达hTERT，人端粒酶逆转录基因（hTERT）能延长细胞染色体的端粒长度，增加染色体稳定性和细胞分裂次数。

（3）病毒基因与hTERT联用。在有些细胞系中仅过表达病毒的基因是不足以诱导细胞的永生化，有时需要与hTERT联用来达到构建永生化细胞系的目的。