我想敲除一个细胞系的基因,常见的方法,工具有哪些?

我想敲除一个细胞系的基因,常见的方法,工具有哪些?

By 减肥呀减肥呀 at 2024-03-14
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我想敲除一个细胞系的基因,常见的方法,工具有哪些?


1 个回复 | 最后更新于 2024-03-14
小脑斧123
2024-03-14
#1

目前最常用的方法是利用crispr-cas9的技术进行基因的敲除,需要将cas9蛋白和gRNA递送到细胞核中。递送的方法有质粒法,病毒法和蛋白法

1)质粒法

常见的cas9-sgRNA 质粒 也有PX458 、PX459,但是质量不能长期稳定的表达

2)慢病毒

将慢病毒会把cas9和gRNA整合到基因组上,进而稳定到表达,这种方式敲除效率高,方便筛选和获取单克隆。

3)蛋白法

直接将cas9蛋白和gRNA转到细胞中,周期短,但是成本高,gRNA容易降解,技术难度大。



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