我做质粒转染效果一直不太理想,一般是什么原因呢?

我做质粒转染效果一直不太理想,一般是什么原因呢?

By 梧桐树下 at 2024-03-08
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1 个回复 | 最后更新于 2024-03-08
云梦
2024-03-08
#1

质粒转染过程种有很多因素会影响转染效率,以下列举一些常见的因素作参考:

① 细胞类型:不同类型的细胞对外源DNA的摄取和转录表达能力存在差异,有些细胞内具有较强的内质网、溶酶体等限制因素,较难接受外源质粒DNA进入细胞,可通过查阅文献和预实验进行检验。

② 细胞状态和密度:转染时要选择细胞对数生长期,细胞密度在50%-80%最佳,细胞密度过高会严重影响细胞状态,进而导致转染效率下降;密度太低可能会使被没有转入质粒的细胞淹没。如果细胞状态不好或密度不适合,最好做相应的调整后再进行转染,否则只会造成浪费。另外细胞污染也是导致细胞状态差的常见因素。

③ 质粒的纯度:如果提取的质粒中含有盐离子、蛋白、内毒素等污染物会大大降低转染复合物的有效形成,内毒素会对细胞产生很大的毒性,因此一般用去内毒素的提取试剂盒进行抽提。

④ 质粒与转染试剂的比例:不同细胞以及使用不同转染试剂的效率差别很大,一般需要根据转染试剂说明书进行预实验,优化质粒与转染试剂的比例,摸索最佳转染条件。

抗生素:质粒转染过程中不建议使用含抗生素的培养基,因为转染过程中细胞通透性增加,会使抗生素进入细胞,进而降低细胞活性,导致转染效率下降。



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