做敲低,用siRNA转染细胞有70%-80%的敲低效率,为什么同样的靶点做成shRNA慢病毒(Lentivirus)就检测不到干扰效果呢?

做敲低,用siRNA转染细胞有70%-80%的敲低效率,为什么同样的靶点做成shRNA慢病毒(Lentivirus)就检测不到干扰效果呢?

By 落落 at 2024-03-07
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做敲低,用siRNA转染细胞有70%-80%的敲低效率,为什么同样的靶点做成shRNA慢病毒(Lentivirus)就检测不到干扰效果呢?

1 个回复 | 最后更新于 2024-03-07
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2024-03-07
#1

siRNA是直接合成的双链RNA,进入细胞内参与RNAi途径,使靶基因沉默。慢病毒携带的shRNA则需要先整合至细胞基因组,再利用细胞内的Dicer酶生成相应的siRNA,发挥RNAi作用。正常来讲siRNA的瞬时作用效果本来就比shRNA要好些,另外还需要考虑感染效率的问题,如果病毒感染效率不高,整合的shRNA就会更少,效果自然更差,这种情况建议可以通过药物筛选,提高阳性细胞的比例,理论上来说会提高一些敲低效率。另外,细胞内的信号一般都存在反馈机制,可能是目的基因本身的负反馈机制导致回补现象。


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