50kDa和25kDa是抗体的轻重链，如果目的蛋白大小不在50kDa或25kDa附近，可以不用在乎这两杂带，如果目的蛋白大小靠近50kDa或25kDa，可以选择不同种属来源的一抗分别进行免疫沉淀和WB，然后再选择无种属交叉反应的二抗进行WB实验，或者选择特殊的二抗，比如只识别轻链或重链的二抗进行WB实验。