① 抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。② 抗原修复不全，抗体无法识别。③ 组织切片本身这种抗原含量低。④ 血清封闭时间过长，导致目的蛋白也被封闭，抗体无法识别。⑤ DAB 孵育时间过短，未染色上。⑥ 细胞通透不全，导致抗体未能充分进入胞内参与反应。