做miRNA干扰时,用qPCR检测不到miRNA表达下调是什么原因?

做miRNA干扰时,用qPCR检测不到miRNA表达下调是什么原因?

By 梧桐树下 at 2023-11-10
0人收藏 • 303人看过


1 个回复 | 最后更新于 2023-11-10
云梦
2023-11-10
#1

miRNA干扰则基本上不适合用qPCR检测敲低水平,它本质上都是用成熟体的反义序列对其进行结合,进而阻断miRNA与靶基因结合。总的来说,检测不到miRNA水平下降是因为并没有被降解,只是位点被反义链封闭,使其功能受到了抑制。所以即使检测不到下调,也不能代表没有抑制,可以通过检测其靶基因的表达变化来验证。那么miRNA与反义链形成双链RNA没有被降解的原因主要为:

1)反义RNAmiRNA结合后,序列很短,导致细胞内负责降解双链RNADicer酶不能有效结合,而无法降解。

2miRNARISC复合物的形式存在,该复合物也会使Dicer酶无法高效结合。

3miRNA海绵属于不完全互补的反义RNA重复,也可以防止被降解。



登 录