构建载体时如何选择启动子

构建载体时如何选择启动子

By 小脑斧123 at 2023-11-01
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1 个回复 | 最后更新于 2023-11-01
减肥呀减肥呀
2023-11-01
#1

1、首先确定实验对象是细菌、动物还是植物。
2、(下面以哺乳动物为例)
3、确认是做动物实验还是细胞实验。
4、如果是做细胞实验,需要先确定是过表达目的基因还是干扰目的基因,如果是过表达则可以选择CMV、EF1a等二型启动子;如果是干扰则可以选择U6、H1等三型启动子。这里需要特别注意的是三型启动子不能启动含有连续四个T的干扰序列,如果干扰序列中含有连续的四个T,那么则需要更换启动子为二型启动子,干扰序列采用mir-30结构。
5、如果是做动物实验,则需要确定是否需要特异性表达,以此来确定是否需要选择特异性启动子。无论是过表达目的基因还是干扰目的基因都可以用特异性启动子来启动,不过需要注意的是使用特异性启动子时,干扰序列要使用mir-30结构。如果不需要用到特异性启动子,则按照上述做细胞实验的方法来选择启动子。


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