基因表达：启动子+基因 CDS——转录成 mRNA——翻译成蛋白

T2A 连接两个基因时，两个基因连接成为一个 ORF（开放阅读框），转录为一条 mRNA， 翻译成一个融合蛋白（由自裂解肽 T2A 连接），这个融合蛋白会被识别 T2A 的蛋白酶切成两个蛋白。所以这两个蛋白的摩尔比理论上是1:1。
缺点：T2A 是一个大约 23 个氨基酸的多肽。切割后前后蛋白会带有 T2A 残基。 T2A 连接时是转录、翻译之后再进行切割的，所以前一个基因不需要带终止密码子。

IRES（核糖体插入位点），IRES 作为额外的核糖体募集位点起作用，允许翻译起始发生在除了翻译起始位点之外的 mRNA 内部区域。连接两个基因时，两个基因连接成为一个 ORF（开放阅读框），转录为一条 mRNA，但是翻译的时候由于 IRES 位点引入核糖体，两个基因分别有自己的起始密码子和终止密码子，可以同时翻译成为两个独立的、无修饰的蛋白。
缺点： IRES 的存在有时候会影响 mRNA 的结构，后面的基因翻译蛋白的水平有可能与 IRES 前面的基因蛋白水平不一致。