目的基因带 3FLAG 标签,用目的抗体和 FLAG 抗体进行WB 检测,结果分别是什么样的?对照载体上的 3FLAG 会不会表达?

目的基因带 3FLAG 标签,用目的抗体和 FLAG 抗体进行WB 检测,结果分别是什么样的?对照载体上的 3FLAG 会不会表达?

By 减肥呀减肥呀 at 2023-10-25
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目的基因带 3FLAG 标签,用目的抗体和 FLAG 抗体进行 WB 检测  分别是什么样的?对照载体上的 3FLAG 会不会表达?

1 个回复 | 最后更新于 2023-10-25
小脑斧123
2023-10-25
#1

一个 FLGA 是 8 个氨基酸,3FLGA 就是 24 个氨基酸;一个氨基酸的平均分子量
是0.110 KDa,所以3FLGA大小是2.64KDa;举个例子,一个蛋白是53KDa (P53),
加上 3FLGA 标签之后就是 55-56KDa。
用目的基因抗体检测的时候可能会看到两条带,本底的一条和外源表达的一条,
但是很多时候两条带会在一起形成一条比较粗的条带;
用 FLGA 抗体检测的时候,只能看到一条外源表达的条带。
空载体上的 3FLGA 一般是不能表达的,因为一般 3FLGA 之前不会再特意加上
ATG;就算特意加上 ATG 了,一是形成的蛋白太短了会被细胞识别而被降解掉;
二是就算没被降解,跑 WB 的时候因为只有 2.64KDa,也会因为跑出去而看不到。


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