目的条带较弱可能的原因和调整方法：1）一抗与二抗非特异性结合：可以考虑降低抗体浓度、降低蛋白上样量、增加洗涤次数或者用含脱脂奶粉的TBST稀释抗体，并适当提高去垢剂的浓度；2）封闭不完全：适当延长封闭时间；3）洗涤不充分：适当增加洗涤次数或者适当提高去垢剂的浓度，不要多张膜放在一起洗，容易粘在一起，造成洗涤不充分；3）曝光时间过长：手动调整曝光时间。