单个的Flag由8个氨基酸组成，大小约1Kda，常规是3×Flag，对目的基因的大小影响不是很大，WB检测的条带大小主要根据目的基因的条带大小判断，在其大小附近；二抗也是抗体，一抗是和目的基因结合的，二抗是和一抗结合的；放大一抗的信号，因此，二抗是由一抗的种属决定的，如果一抗是鼠来源，那么二抗就是用抗鼠；如果一抗是兔来源，那么二抗就用抗兔。