荧光强弱跟什么有关?

荧光强弱跟什么有关?

By 减肥呀减肥呀 at 2023-09-18
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荧光强弱跟什么有关?为什么我的荧光很弱有什么原因吗

1 个回复 | 最后更新于 2023-09-20
lemons
2023-09-20
#1

1)启动子强弱
A. 过表达用的是 III 型启动子,是依赖 III 型 RNA 聚合酶的启动子,可以启
动长的片段,比如 CMV、EF1A 依赖 PolyA 进行转录终止。
B. 干扰用的是 II 型启动子,是依赖 II 型 RNA 聚合酶的启动子,比如 U6,H1
启动子,聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时,它指导的转录就会停止。
2)表达框结构:荧光融合蛋白(自剪切 Linker) or 非融合(IRES,2A 肽)。
一般来说外源基因的插入,目的组一般都会比对照差,而且随着插入的片段的增大,荧光表
达越弱。但是在实际实验的过程中我们发现,插入外源基因是会影响荧光的强度,但是和插
入的片段大小不一定是成正比的。(非融合的)细胞内基因表达之间是竞争性关系的,所以
插入外源基因是会影响荧光的强度的,IRES 前后非等量表达,后面的弱很多,2A 前后理论
上等量表达。
对于荧光融合蛋白,目的基因大小以及目的基因的功能都会对荧光的表达水平有所影响;可
能是插入的片段引起了翻译效率的改变,不同的序列引起翻译效率改变也是不一样的。
3)其他常规原因,包括病毒滴度、细胞感染难易程度等


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