我需要在细胞水平模拟磷酸化和非磷酸化,要如何突变?有哪些方法?需要注意哪些?

我需要在细胞水平模拟磷酸化和非磷酸化,要如何突变?有哪些方法?需要注意哪些?

By 云梦 at 2023-09-15
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1 个回复 | 最后更新于 2023-09-15
梧桐树下
2023-09-15
#1

模拟磷酸化,一般是将磷酸化的位点突变为天冬氨酸(D),去磷酸化一般是将磷酸化位点突变为丙氨酸(A);如何达到目的,首先要考虑是外源性突变还是内源性突变,如果是内源性突变,可以考虑用Crispr cas9的方法做敲入;如果是外源性的,可以构建相关的突变载体,可以用普通的过表达载体,也可以用病毒载体,包装成病毒后感染细胞;但是外源性的不会影响本底的磷酸化水平,如果该基因本底较低,建议先将本底基因敲除或者敲低后再模拟磷酸化,或者选择本底表达较低的细胞进行实验。


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