编码基因依靠3联密码子来编码蛋白，最终通过蛋白序列来表现基因功能，在做敲除的时候，某一个点的改变就可以导致这个序列翻译出来蛋白序列发生改变，即移码突变，这样的突变就可以导致蛋白功能的丧失。但是非编码基因是以RNA的形式作用，某个位置的点突变或indel发生后很难使其丧失功能，除非这个突变位点是该序列发生作用的唯一位点（这种情况概率极小，相当于是基因组的定点突变），所以非编码的敲除需要在两端各设计一个sgRNA。