载体加flag标签的目的是什么?

载体加flag标签的目的是什么?

By lemons at 2023-08-28
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1 个回复 | 最后更新于 2023-08-29
减肥呀减肥呀
2023-08-29
#1

蛋白标签(protein tag)是指利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白质,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等,我们公司载体上常用的标签是 Flag,方便在 WB 检测担保表达情况时用 3*Flag(分子量 2.64kd,一个氨基酸的平均分子量是 0.110KDa)抗体去检测外源蛋白过表达情况:用 Flag 抗体去检测,结果是一条一条外源表达的条带;用目的抗体去检测,结果应为两个条带(内源蛋白+外源过表达蛋白),外源过表达条带在内源条带的上方,但是很多时候两条带会在一起形成一条比较粗的条带;用 Flag 空载体上的 3FLGA 一般是不能表达的,因为一般 3FLGA 之前不会再特意加上ATG;就算特意加上 ATG 了,一是形成的蛋白太短了会被细胞识别而被降解掉;二是就算没被降解,跑 WB 的时候因为只有 2.64KDa,也会因为跑出去而看不到。



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