为什么我做实验用腺相关病毒( aav) 体外感染效率很低 (AAV 在细胞上的表达远比不上在动物体内的表达)?

为什么我做实验用腺相关病毒( aav) 体外感染效率很低 (AAV 在细胞上的表达远比不上在动物体内的表达)?

By 减肥呀减肥呀 at 2023-08-21
0人收藏 • 380人看过

为什么我做实验用腺相关病毒( aav) 体外感染效率很低 (AAV 在细胞上的表达远比不上在动物体内的表达)?

1 个回复 | 最后更新于 2023-08-21
lemons
2023-08-21
#1

AAV 载体在体外实验中用于感染细胞时,常发现其表达水平较低,而且有表达延迟现象。这是因为AAV基因组是单链DNA的,它进入细胞以后,必须要有一个由单链变为双链的过程,然后其所携带的外源基因才能进行转录和翻译,在没有辅助病毒或其它辅助因子的情况下,这种 AAV 由单链 DNA 在细胞内复制形成双链 DNA 的过程是十分缓慢的,因此相对于其它双链DNA 病毒载体如单纯疱疹病毒(HSV)和腺病毒(Ad),其表达明显延后。此外,AAV 对细胞毒性低,培养的细胞在加入 AAV 后,细胞分裂生长能力不受太大的影响,这样也对 AAV 载体有一种稀释作用,也导致其表观表达水平较低。而在体内应用时,注射部位的组织细胞通常没有显著增殖,不会出现 AAV 载体被稀释的情况,而且在体内各种进 AAV 载体所携带外源基因表达的各种因子相对丰富,故体内应用时,AAV 载体的表达水平比较高。研究表明辅助病毒或其它辅助因子可以明显促进单链 DNA 复制成双链 DNA,从而明显提高外源基因的表达水平,故在体外应用可以考虑加入辅助病毒(Ad5)或丁酸钠(终浓度 10~50mmol/L),这样可以提高表达水平达 5~10 倍。


登 录