WB检测

WB检测

By 云梦 at 2023-08-18
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WB检测目的蛋白时,无信号,即没有阳性条带,除了换抗体,还可以从哪些方面进行改进


WB
1 个回复 | 最后更新于 2023-08-18
梧桐树下
2023-08-18
#1

WB结果种无条带信号,可以从抗体、抗原、实验操作和缓冲液这几个方面分析。1)抗体:二抗是否选择合适,抗体浓度是否合适?抗体是否适用于WB,抗体是否失效等;2)抗原:抗体是否能识别抗原?目的蛋白量是否足够,是否发生降解?一般每个泳道的蛋白量不低于20-30 µg,加蛋白酶抑制剂并设置阳性对照;3)实验操作:转膜不充分?洗膜次数过多?4)缓冲液相关原因:封闭液与一抗或二抗有交叉反应?ECL发光液失活?显色方式是否选择合适?一般ECL显色比DAB显色灵敏度高5-10倍。


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