慢病毒(lentivirus)感染细胞荧光表达较弱?我应该怎么办

慢病毒(lentivirus)感染细胞荧光表达较弱?我应该怎么办

By 减肥呀减肥呀 at 2023-03-10
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慢病毒(lentivirus)感染细胞荧光表达较弱?我应该怎么办

1 个回复 | 最后更新于 2023-03-10
橘子
2023-03-10
#1

荧光蛋白的亮度与启动子、表达方式和连接原件等有关:


1)不同启动子诱导荧光蛋白表达的强弱不同,如 UBC 相对于 EF1α、CAG、CMV 等强启动子表达较弱;

2)融合或非融合表达与荧光强度也有很大关系,融合表达时荧光蛋白可能出现错误折叠等现象,导致检测不到荧光信号或荧光较弱;非融合表达时一般选择连接肽作为连接原件,如 2A 肽或 IRES 将 ORF 分隔开;

3)带荧光的慢病毒感染细胞后,荧光的强度取决于病毒进入到细胞的颗粒数、细胞状态、细胞类型、观察时间等因素,荧光表达的强度与目的细胞感染病毒的颗粒数正相关,一般感染细胞后72h 观察荧光强度最佳,而增殖较慢的细胞可以适当延长时间;

4)也可能会遇到过表达的慢病毒比对照的荧光要暗的情况,这主要是因为基因的插入,会影响位于下游的荧光蛋白表达。



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