干扰用的是shRNA，是干扰目的基因RNA水平的表达，载体转染细胞后表达出RNA，然后行使功能。Flag是8个氨基酸构成的短肽，氨基酸是蛋白质的基本单位，需要翻译，flag与目的蛋白一起翻译，可以看做是一个融合蛋白。所以两者不是一个层次的表达，一个是RNA水平，一个是蛋白水平的表达，RNA在体内表达后不翻译，自然也就表达不出来flag。而zsgreen、puro是蛋白基因，而且表达的时候使用独立的启动子启动表达，是一个不同于RNA表达的单独表达单元，两者在一个载体上表达，互不影响。