干扰用的是shRNA，是干扰目的基因RNA水平的表达，载体转染细胞后表达出

巨自噬 (Macroautophagy)，微自噬 (Microautophagy) 和分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy, CMA)。

巨自噬：自噬体的双膜囊泡将受损的蛋白质/

效率比较低，费用高，风险也比较高，尤其是没有cas9模型，要通过aav同时导入cas9和gRNA的时候，效率更低，sacas9的特异性比较好，但是编辑效率会低很多，另外在体和体

将分选得到的单克隆细胞进行靶序列pcr产物测序分析，与野生型相比，两条染色体编辑后的序列发生提前终止或者移码突变则认为是敲除成功。

HDR模板（质粒或ssODN）是否包含sgRNA靶位点？

SpCas9中的CBh启动子在什么细胞系中起作用吗？

应该在sgRNA中包含PAM序列吗？

在进行gRNA时候，20 bp目标位点不是以G开头，能用G替换第一个碱基吗？