在进行gRNA时候,20 bp目标位点不是以G开头,能用G替换第一个碱基吗?

在进行gRNA时候,20 bp目标位点不是以G开头,能用G替换第一个碱基吗?

By biothinker001 at 2023-02-10
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在进行gRNA时候,20 bp目标位点不是以G开头,能用G替换第一个碱基吗?

1 个回复 | 最后更新于 2023-02-10
小脑斧123
2023-02-10
#1

为了使sgRNA在U6启动子下有效转录,G优选位于5′位置,其对应于20bp引导序列的第一个碱基。对于不以G开头的引导序列,建议在引导序列的5′上添加一个额外的G,产生一个21 bp的引导序列(5′-GNNNNNNNNnnNNNNNN-NNNNNNNN-3′,其中20个N对应于5′-NGGPAM上游的20 bp基因组靶序列)。添加5′G不会改变sgRNA的特异性或影响Cas9切割的效率。


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