1）有两种荧光素酶，包括海肾荧光素酶（Ranilla Luciferase，rluc）和萤火虫荧光素酶（Firefil Luciferase，fluc），荧光素酶的发光不需要激发光，但是需要底物荧光素，前者底物是肠腔素，后者底物是D-荧光素（D-Luciferin）。大部分的发表文章通常使用萤火虫荧光素酶（fluc）用作报告基因，当然也有用双标记的，我们常规的载体带luc标记的是fluc。
（2）D-荧光素（D-Luciferin），包括D-荧光素钾盐和钠盐，二者在使用效果上无区别，在物理特征上荧光素钠盐溶解度会高于钾盐。但是在体内实验研究中，有更多的研究者倾向于选择荧光素钾盐。
（3）注射方法为腹腔注射或尾静脉注射，推荐剂量为150mg/Kg，具体可咨询卖底物的商家，常用方法是腹腔注射，这种方法扩散较慢、开始发光慢、持续发光长。若进行荧光素静脉注射，这种方法扩散快、开始发光快，但发光持续时间很短。
（4）荧光素腹腔注射老鼠后约1min后，能够表达荧光素酶的细胞开始发光，10 min后强度达到稳定的最高点，在最高点持续约20-30min后开始衰减，约3h后荧光素排除，发光全部消失，检测时间最好是在注射后15-35min内。