活体成像的底物选择及注射方式

活体成像的底物选择及注射方式

By 减肥呀减肥呀 at 2023-02-06
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活体成像的注射方式有哪些,一般是怎么选择底物的?

1 个回复 | 最后更新于 2023-02-07
橘子
2023-02-07
#1

1)有两种荧光素酶,包括海肾荧光素酶(Ranilla Luciferase,rluc)和萤火虫荧光素酶(Firefil Luciferase,fluc),荧光素酶的发光不需要激发光,但是需要底物荧光素,前者底物是肠腔素,后者底物是D-荧光素(D-Luciferin)。大部分的发表文章通常使用萤火虫荧光素酶(fluc)用作报告基因,当然也有用双标记的,我们常规的载体带luc标记的是fluc。
(2)D-荧光素(D-Luciferin),包括D-荧光素钾盐和钠盐,二者在使用效果上无区别,在物理特征上荧光素钠盐溶解度会高于钾盐。但是在体内实验研究中,有更多的研究者倾向于选择荧光素钾盐。
(3)注射方法为腹腔注射或尾静脉注射,推荐剂量为150mg/Kg,具体可咨询卖底物的商家,常用方法是腹腔注射,这种方法扩散较慢、开始发光慢、持续发光长。若进行荧光素静脉注射,这种方法扩散快、开始发光快,但发光持续时间很短。
(4)荧光素腹腔注射老鼠后约1min后,能够表达荧光素酶的细胞开始发光,10 min后强度达到稳定的最高点,在最高点持续约20-30min后开始衰减,约3h后荧光素排除,发光全部消失,检测时间最好是在注射后15-35min内。


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