一般试剂盒上写的是可以一次性连多个片段的。

多片段连接时直接用无缝克隆试剂一次性连接。连接2-3个片段时插入片段总量控制在0.02-0.5pmols，连接30min，插入4-6个片段时插入片段的总量控制在0.2-1.0pmols，连接60min。