如果自噬流正常，LC3II/I蛋白增加的，beclin1蛋白增加，则P62蛋白是减少的（可溶性p62减少，不可溶p62不变）；如果自噬流发生阻碍，如自噬体与溶酶体融合受阻时,p62 会显著性堆积，出现LC3II/I蛋白增加的，beclin1蛋白增加，P62蛋白也是增加的现象（可溶性p62减少，不可溶性p62显著增加）。因此，根据wb结果来看，目的基因的过表达可能影响了自噬溶酶体的形成，这是正常的实验现象。

AAV在体的表达周期可以持续3-6个月，但是不同的器官表达周期有差别。建议做预实验摸索一下具体的表达周期。

这个细胞慢病毒比较好感染，慢病毒MOI在 5-10左右摸索一下就行

circRNA的junction位置为连续A，设计干扰序列时出现连续T，为了在U6启动之下正常转录，可突变掉个别T吗?

构建的质粒上有neor（kanr）抗性基因，这个是什么抗性？

胃部感染案例较少，建议使用广谱型的血清型如AAV9感染

来了，这个siRNA和shRNA还是有所不同，siRNA是双链的RNA的结构，可以直接跟靶点结合进行作用的，效率比较高，shRNA是一个构建到质粒上或者包成病毒，需要转录形成发夹结构的shRNA，经过酶切，才能跟靶点结合，这个过程可能因为拷贝数低，转录过程复杂导致干扰效果不佳的。

过表达了自噬相关基因，实现了自噬可视化，检测自噬水平。LC3是自噬相关蛋白，自噬发生时与自噬小体结合，LC3与mcherry，GFP融合表达，所以自噬发生时在红光和绿光通道下可以看到聚集的红色和绿色斑点，斑点数量越多代表自噬小体数量越多，自噬发生程度越高。

T0时期的小鼠比较小，建议注射0.1 ul左右

感染脂肪组织可以用aav8和aav9这两个血清型。

氯喹和巴氟洛酶素 

人骨肉瘤细胞HOS慢病毒（lentivirus）感染MOI是多少？

慢病毒（lentivirus）MOI推荐10-20左右。

沾染过工具病毒的相关器物需要经过消毒液浸泡或者其他安全处理后放到实验室指定位置，统一处理，不可以随意丢弃。

做好的标本还能用自噬双标慢病毒（lentivirus）检测自噬流吗

su-dhl-4 这个细胞可以用慢病毒感染吗？效果如何

小鼠乳腺癌细胞比较难感染，建议MOI 100左右

小鼠乳腺癌细胞4T1慢病毒（lentivirus）感染MOI一般是多少？

可以在20-40这个范围内摸索一下

人前列腺癌细胞PC-3慢病毒（lentivirus）感染MOI是多少？

慢病毒MOI推荐10

已经带了绿色荧光，就不能再用自噬双标的了，可以用红光单标。

 flag，6*his都可以，只要有带相应的亲合配体对的磁珠就可以，这些应该都是有商业化的产品。

3flag蛋白标签是24个氨基酸，分子量大约2.6 kda。

几种病毒做cas9敲除有区别吗？做敲除需要稳转吗？

慢病毒（lentivirus）感染干细胞，过表达启动子能用CMV启动基因表达吗？

用腺相关病毒AAV2大鼠玻璃体腔注射感染眼睛，一次注射多少腺相关病毒？

慢病毒MOI推荐1-10

腺病毒MOI推荐10-30

K562很难转染，建议用慢病毒感染或者改造过的腺病毒