puro浓度预实验是怎么做的?

puro浓度预实验是怎么做的?

By lifangtang at 2022-07-28
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puro浓度预实验是怎么做的?

1 个回复 | 最后更新于 2022-07-28
momo
2022-07-29
#1

一般为了筛选到稳定表达待研究基因的细胞株,确定杀死未转染细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。所以初次做实验的时候一定要建立适合自己体系的杀死曲线( kill curve ): (1) 96孔板内以5-8x 10^3 cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验,细胞孵育过夜; (2) 准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-10μ g/mL,至少5 个梯度); (3) 细胞孵育过夜后加入筛选培养基,孵育细胞; (4) 约2-3天更换新鲜的筛选培养基; (5) 每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-3天之间; (6) 最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始3天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。 


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