1）第一个可能是模板量低或基因表达丰度低，建议增加模板量观察Ct 值能否成相应倍数减少。2）第二个可能是 qPCR 整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低，建议通过标准曲线确认扩增效率。3）第三个可能是扩增产物过长，建议用三步法程序扩增或通过优化引物，扩增产物长度最好不超过 300bp。4）第四个可能是体系中存在抑制剂影响酶的活性，建议梯度稀释模板或重新制备纯度更高的模板。