QPCR 实验中 Ct 值偏大(如 Ct 值>30)是为什么?
QPCR 实验中 Ct 值偏大(如 Ct 值>30)是为什么?
By momo
at 2022-07-29
0人收藏 • 627人看过
QPCR 实验中 Ct 值偏大(如 Ct 值>30)是为什么?
- 登录后方可回帖
1 个回复 | 最后更新于 2022-07-29
1)第一个可能是模板量低或基因表达丰度低,建议增加模板量观察Ct 值能否成相应倍数减少。2)第二个可能是 qPCR 整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低,建议通过标准曲线确认扩增效率。3)第三个可能是扩增产物过长,建议用三步法程序扩增或通过优化引物,扩增产物长度最好不超过 300bp。4)第四个可能是体系中存在抑制剂影响酶的活性,建议梯度稀释模板或重新制备纯度更高的模板。