进行一个基因的过表达,添加 flag 标签的目的是什么呢?

进行一个基因的过表达,添加 flag 标签的目的是什么呢?

By momo at 2022-08-05
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进行一个基因的过表达,添加 flag 标签的目的是什么呢?

2 个回复 | 最后更新于 2022-08-05
lifangtang
2022-08-05
#1

蛋白标签(protein tag)是指利用 DNA 体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白质,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。比较常用的Flag标签,一般用3FLAG(分子量 2.64kd,一个氨基酸的平均分子量是 0.110KDa)的比较多,主要是方便在 WB 检测表达情况时可以用 Flag抗体去检测外源蛋白过表达的情况,也可以方便的用于蛋白免疫沉淀实验(Immunoprecipitation, IP)。

lifangtang
2022-08-05
#2

对于带3FLAG标签的蛋白用 Flag 抗体进行蛋白免疫印迹(western blot,WB)检测时,结果会是一条外源表达的条带;如果用目的抗体去检测,结果可能会是两个条带(内源蛋白+外源过表达蛋白),外源过表达条带在内源条带的上方,但是很多时候两条带会在一起形成一条比较粗的条带。


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