mRNA敲除验证时PCR与WB蛋白结果不一致该信谁呢?

mRNA敲除验证时PCR与WB蛋白结果不一致该信谁呢?

By nanana at 2023-09-06
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1 个回复 | 最后更新于 2023-09-08
小脑斧123
2023-09-08
#1

基因敲除一般分为两种情况:一种是把目的基因的DNA外显子编码序列全部敲除;第二种是敲除外显子上部分编码蛋白的序列,因为敲除的外显子序列为非三的整数倍,所以这种情况会造成蛋白翻译移码突变,从而进一步实现了相应蛋白功能的敲除。因此如果通过对目标序列进行PCR和测序鉴定确定目的基因在DNA水平删除了相应DNA序列的话,相应的蛋白就会因为缺少正确的DNA翻译模板无法合成正确的蛋白WB抗体本身存在一定的非特异性结合,有可能出现假阳性结果所以,有WB条带不一定就代表蛋白还有功能。WB只是建立在DNA序列正确基础上检测蛋白表达的一种手段,其结果不能单方面作为鉴定结果判断



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