消化细胞所用的胰蛋白酶怎么选择?其成分中的EDTA有什么作用?

消化细胞所用的胰蛋白酶怎么选择?其成分中的EDTA有什么作用?

By nanana at 2023-08-23
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1 个回复 | 最后更新于 2023-08-23
小脑斧123
2023-08-23
#1

贴壁不牢和半贴壁细胞尽量使用浓度0.05%不含EDTA的胰酶,这样易于控制,对细胞的伤害也降到最低。对于难消化的细胞更适合选择EDTA0.25%的胰酶

EDTA是钙离子的鳌合剂,胰酶切割ECM负责粘连和附着的蛋白,而EDTA通过螯合Ca2+,抑制整合素的贴壁活性,所以EDTA的作用更加温和在胰酶中加入EDTA的作用简单的说就是为了增加胰酶的消化作用,尤其适用于比较难于消化的细胞可以减少胰消化时间,以减少酶对细胞的损伤作用,含EDTA的酶作用后,必须离心才能去除EDTA

根据实验需求许多人不用胰酶,只用EDTA,或者用胰酶/EDTA联合作用。例如在做细胞凋亡检测时,细胞不能用含有EDTA的胰酶消化,Annexin V(膜联蛋白)是Ca2+依赖的蛋白,EDTA会螯合Ca2+从而影响Annexin V,进而影响结果,因此需选用不含EDTA的胰酶。



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