基因截断和定点突变

基因截断和定点突变

By 亿清 at 2023-05-11
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目的基因已经构建到质粒上,想对目的基因里面的150bp进行缺失,利用HB-infusion无缝克隆试剂盒操作的话怎么设计引物?想对目的基因进行定点突变,引物又该怎么设计?

1 个回复 | 最后更新于 2023-08-07
橘子
2023-08-07
#1

无缝克隆试剂盒设计引物进行150bp碱基的缺失的话,比如把这个目的基因分为A-B-C 3段(B是这150bp),目的基因头部引物For-A和尾部引物Rev-C仍正常设计(引物含与载体同源的序列15-20bp和目的基因序列);基因中要缺失B的这块的引物就跨越这150bp,合成用于扩增片段A的下游引物Rev-A和用于扩增片段C的上游引物For-C,Rev-A和For-C就在A的尾部和C的头部设计同源序列引物+一定长度的各自的片段序列。

然后For-A+Rev-A扩增片段A,For-C+Rev-C扩增片段C,与线性化的载体片段一起进行无缝克隆即可。

引物设计如下图解。或者可参考小恒学术视频教程

小恒学术——SnapGene使用(二)_哔哩哔哩_bilibili

直接用snapgene进行引物设计。

infusion.jpg

进行目的基因定点突变也可以参考上面删除片段的方法,引物在突变位点处设计即可(突变位点位于引物上,通过引物引入突变)。



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