蛋白磷酸化是调控蛋白功能和活性的重要方式，通过构建模拟磷酸化和非磷酸化的突变是研究磷酸化蛋白的一种常用方法。比较常见的磷酸化位点有Ser、Thr和Tyr等，特别是Ser。模拟磷酸化，可以将原氨基酸突变为Glu或Asp。蛋白磷酸化使得带有磷酸基团受体的氨基酸残基增加了净负电荷，模拟磷酸化的酸性氨基酸（Glu和Asp）的负电荷侧链在一定程度上模拟了蛋白质磷酸基团的添加，且长度相似。模拟非磷酸化则突变为Ala或Phe，即将有磷酸基团受体的氨基酸残基替换为不带电和不能磷酸化的氨基酸残基。