你的腺病毒用的是Adeasy系统吧，pacI酶切是重组后验证的吧。如果是以上情况，重组阳性的PacI酶切应该是3k或者4.5k的条带，如果只有一条条带，证明腺病毒没有重组成功，应该只是穿梭载体。原因可能有以下：1.穿梭载体（track或者shuttle）没有酶切好，没有去磷酸化；2.Bj5183活性有问题，RecA酶活性低3. Adeasy比较大,容易降解。