换液时间可以延长一些，细胞能忍受的情况下可以延长到12h换液甚至24h换液，如果首次使用这个质粒就排除下质粒本身的问题，如果gfp空载要是也不亮考虑一下自己转染过程中可能存在的原因，另外种板只种50%的细胞别太满