puro抗性基因会一直表达,就是冻存再复苏，也会影响,筛选完后，用筛选的嘌呤霉素的用量的一半，继续培养,后面一直这样,药不能停, 做功能学实验，做这种实验前一般会提前个3-4天停可以停药,防止嘌呤霉素对实验有影响