构建载体转化不长斑之前也遇到过，认为有两种可能：1，载体和片段连接不成功（酶切连接），2，感受态细胞状态不好，不只你是否左右对照，对照质粒如果不成功那就考虑转化的问题，对照成功就考虑构建的问题。