用带puro的质粒或病毒去做crispr/cas9,是直接用嘌呤霉素去筛就可以筛到稳定敲除的了吗?
用带puro的质粒或病毒去做crispr/cas9,是直接用嘌呤霉素去筛就可以筛到稳定敲除的了吗?
By MR. 司
at 2020-12-14
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用带puro的质粒或病毒去做crispr/cas9,是直接用嘌呤霉素去筛就可以筛到稳定敲除的了吗?
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1 个回复 | 最后更新于 2020-12-14
不可以的,我们在做敲除的时候可以出现多种编辑情况:碱基点突变,indel,用puro筛选只能将转染成功的细胞筛选出来,出来的仍然是一个混合的细胞群体,这些细胞中,有的是敲除成功的,大部分是未成功敲除的,最后还是需要挑单克隆测序才行。