小恒学术问答
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最后活动于1970-01-01
回复了主题 › 慢病毒（lentivirus , LV）如何稀释？
用常规培养基、生理盐水、Hanks液、PBS液等将慢病毒稀释到需要的滴度。如原病毒标记滴度为5 x 10^8 TU/ml，则取20 µl病毒液加入到80 µl的常规培养基中，即可得到1 x 108 TU/ml的病毒稀释液。
« 2022-08-16
回复了主题 › 腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）感染肝细胞的话，需要用什么浓度，大概可以维持表达多长时间呢？
具体要看体内实验还是体外实验，体外实验不推荐用AAV。如果是体内实验，AAV注射量100-150ul，可以维持3-6个月。
« 2022-08-16
回复了主题 › 慢病毒（lentivirus , LV）感染细胞时，细胞接种量是多少比较好呢？
一般是根据细胞生长速度调整细胞接种量的，以确保感染后2-3天细胞可以长满培养皿底部。对于大部分细胞，传代周期在2-3天，感染时细胞铺板的密度保持在30%左右比较好。对于一些生长速度慢的细胞，可以在接种时提高细胞汇合度到50%左右。
« 2022-08-16
创建了主题 › 我的细胞生长不均匀怎么办？
我的细胞生长不均匀怎么办？
« 2022-08-10
创建了主题 › 细胞应该在什么时候进行传代？
细胞应该在什么时候进行传代？
« 2022-08-10
创建了主题 › 使用mRFP-GFP-LC3自噬双标病毒做细胞爬片的话，感染之后，还需要什么操作再去荧光显微镜下观察呀？
使用mRFP-GFP-LC3自噬双标病毒做细胞爬片的话，感染之后，还需要什么操作再去荧光显微镜下观察呀？
« 2022-08-10
回复了主题 › 我想做双荧光素酶实验，一定要用293t细胞来做吗？
也不一定，用其他质粒转染效率高的细胞来做也可以，最好是工具细胞，细胞质粒转染效率较高的情况下得出来的数据比较准确。
« 2022-08-03
回复了主题 › 我用腺病毒感染前一天提取的原代巨噬细胞，细胞状态那时候不错，感染时用的无血清无双抗的培养基，感染后16h后换的液，感染后细胞死了很多，而且荧光效率也低，用的MOI是已经预实验摸索过的，为什么出现这种情况呢？
原代细胞如果刚提取，可能状态没调整过来就直接感染的话会导致感染后效果差，而且一般6-8小时就能有效感染，是不是可以稍微调整细胞状态再进行感染，并将感染时间缩短，而且原代细胞比较脆弱，感染时可以用完全培养基。
« 2022-08-03
回复了主题 › 我的目的细胞是人髓核细胞，请问有人做过吗？用腺病毒还是慢病毒感染啊？
这个细胞我之前看到文献有人用慢病毒做过，效率也还可以，但是不同实验室养的细胞状态不太一样，可以用带荧光的慢病毒先试一下，看看感染效果
« 2022-08-03
创建了主题 › 之前做cirRNA跟miRNA结合预测到了一些miRNA，我要怎么查到这些miRNA的信息啊？
之前做cirRNA跟miRNA结合预测到了一些miRNA，我要怎么查到这些miRNA的信息啊？
« 2022-08-03
创建了主题 › 我想给人脐带间充质干细胞做永生化，还要敲入一个基因做过表达稳转株，这个要怎么弄比较好啊。
我想给人脐带间充质干细胞做永生化，还要敲入一个基因做过表达稳转株，这个要怎么弄比较好啊。
« 2022-08-03
创建了主题 › 提出来的RNA里有有线性RNA和circRNA，想去掉线性RNA，去检测样本里的circRNA，可以有方法做得到么？
提出来的RNA里有有线性RNA和circRNA，想去掉线性RNA，去检测样本里的circRNA，可以有方法做得到么？
« 2022-08-02
创建了主题 › 想看miRNA和靶基因的结合，比如lncRNA、circRNA、mRNA，种子区预测和自由能预测有什么区别吗？
想看miRNA和靶基因的结合，比如lncRNA、circRNA、mRNA，种子区预测和自由能预测有什么区别吗？
« 2022-07-27
创建了主题 › 我的siha细胞复苏的时候一定要去除DMSO吗，可以直接复苏培养吗？
我的siha细胞复苏的时候一定要去除DMSO吗，可以直接复苏培养吗？
« 2022-07-27
回复了主题 › 我要做敲除，但是基因长度有7566bp，这么长做敲除没问题吧？
我觉得是可以做敲除的，做敲除现在是用crispr/cas9技术对基因组进行编辑的嘛，利用移码突变使蛋白翻译异常或提前终止，移码突变之后后面的氨基酸就变化了，基因的长度对这个影响不是很大
« 2022-07-26
创建了主题 › 腺相关病毒aav2/5，aav2/8，aav2/9是啥意思，aav的血清型吗？
腺相关病毒aav2/5，aav2/8，aav2/9是啥意思，aav的血清型吗？
« 2022-07-25
回复了主题 › 蛋白条带长度不一，为什么？
我们也出现过这种问题。楼主是不是测浓度的时候不准啊，可以考马斯亮蓝染一下。或者也可能是胶、转膜、孵抗体或者显影液加得不均匀？重新跑一下，加几个以前跑得齐的样品做参照看看哪里出问题了
« 2022-07-20
回复了主题 › 我养的小鼠原代T细胞，应该用什么病毒感染进行实验呢？
这细胞挺不好做的，要不试试T细胞用的逆转录病毒吧，或者是那种悬浮细胞专用的腺病毒。
« 2022-07-20
