荧光强弱跟什么有关？

1）启动子强弱
A. 过表达用的是 III 型启动子，是依赖 III 型 RNA 聚合酶的启动子，可以启
动长的片段，比如 CMV、EF1A 依赖 PolyA 进行转录终止。
B. 干扰用的是 II 型启动子，是依赖 II 型 RNA 聚合酶的启动子，比如 U6，H1
启动子，聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止。
2）表达框结构：荧光融合蛋白(自剪切 Linker) or 非融合（IRES，2A 肽）。
一般来说外源基因的插入，目的组一般都会比对照差，而且随着插入的片段的增大，荧光表
达越弱。但是在实际实验的过程中我们发现，插入外源基因是会影响荧光的强度，但是和插
入的片段大小不一定是成正比的。（非融合的）细胞内基因表达之间是竞争性关系的，所以
插入外源基因是会影响荧光的强度的，IRES 前后非等量表达，后面的弱很多，2A 前后理论
上等量表达。
对于荧光融合蛋白，目的基因大小以及目的基因的功能都会对荧光的表达水平有所影响；可
能是插入的片段引起了翻译效率的改变，不同的序列引起翻译效率改变也是不一样的。
3）其他常规原因，包括病毒滴度、细胞感染难易程度等