请问转染过质粒的细胞培养两天后全飘起来了,这是什么情况啊?

By Heng at 2015-02-06 • 0 人收藏 • 10385 人看过
请问转染过质粒的细胞培养两天后全飘起来了,这是什么情况啊?
1 个回复 | 最后更新于 2015-02-06
2015-02-06   # 1
可以从这几个方面考虑:1.培养基是否在转染24小时前换成无双抗的,必须要换2.看清楚质粒提取试剂盒是否去除内毒素。3.如果你用的是Invitrogen Lipofectamine 2000,你需要参照后面的列表来进行实验,同时也要确认你的Lipofectamine 2000是否过期,尽量使用开封半年内的Lipofectamine 2000,因为过了半年后,就算没有过失效期,但是细胞毒性大大增加,而转染效率却大大下降。4.培养板非常容易污染,所以你要排除微生物污染这个可能.5.在转染5小时后(左右)吸去上层液体,换成含血清无双抗的培养基继续培养.6.转染前你培养了多少时间?如果进行顺式转染,必须在细胞生长达到70-80%再进行转染7.试试把脂质体剂量减小点,说明书上推荐的浓度通常偏高,可以用较小的剂量试试。各种培养细胞或细胞株对转染试剂的毒性敏感程度不一样,脂质体的毒性大一些,如果是转染试剂的问题,建议使用毒性低一些的转染试剂,如阳离子聚合物转染试剂.

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