慢病毒感染目的基因整合

2015-09-16   # 1

慢病毒在靶细胞中表达分为整合表达及非整合表达，一般而言对于携带抗性基因的载体而言（无论是质粒载体还是慢病毒载体），蛋白表达后药物筛选时间一般为2~3周时间，此时获得的细胞群基本上认为是整合表达的，也就是所谓的稳定表达。从这个意义上来说，通过你说的将感染的细胞培养3~4周后，再进行流式分选理论上是可以很大程度减少非整合表达细胞的比例。因为稳定株后续培养中仍有可能将整合的基因发生丢失，即使比例比较低，但这少部分发生丢失的细胞以及分选中可能残留的少部分未感染的细胞会因为生长优势而使得其比例越来越高，又因为你的载体是不具备抗性基因的，所以后续如果观察荧光比例明显降低的话，只能再次通过流式进行分选了。