这个需要看情况，如果预测位点是转录因子的结合位点的话，进行突变后可能会降低了转录效率，LUC表达减少，LUC值就随之降低了；如果预测位点不是的话，可能影响不大。做预测结合位点突变，也正是验证二者具体结合位点的方法

腺病毒可以在293A细胞中自我复制，因此可参考腺病毒包装过程中的扩增步骤进行病毒扩增，可以不用重新包毒。

慢病毒感染细胞用puromycin筛选得到稳转株之后，需要定期使用含有puromycin的培养基培养细胞，以免出现基因丢失的情况。建议后期培养浓度可以按照1/10~1/2的筛选浓度。

siRNA和shRNA在结构上是不一样的，siRNA为化学合成，使用浓度一般为5μM，浓度较高，如细胞转染效率尚可，瞬时进入细胞中的分子数超过10^8，且不需要经过剪切加工就可和靶点结合，干扰效率高。
shRNA则是将干扰基因克隆到载体上，经过病毒整合（慢病毒）或非整合（腺病毒，腺相关病毒）进入到细胞后，转录形成发夹RNA，再经过一系列酶的剪切加工，才形成可以和靶点结合的干扰RNA。这个过程中因为拷贝数低（如慢病毒需要整合基因组），转录加工过程复杂，会导致干扰效果不理想。
另外，单从碱基数上来说，siRNA一般为19nt， shRNA一般长度为21nt或25nt

我想做诱导因素对某一个启动子活性的调节作用，这种应该是用什么荧光素酶载体呢？

我用sirna来做敲低，发现用量低的反而比用量高的siRNA敲低效果要更好，这种情况是正常的吗？

自己做双荧光素酶实验，最后检测的荧光值很低，只有几十到几百是什么原因？